Komplementfixační reakce (KFR). ("Vazba komplementu.")
KFR je serologická reakce využívající ozřejmění reakce antigen-protilátka vlastností komplementu. Komplement je vícesložkový rozpustný systém krevní plazmy, který je aktivován protilátkou navázanou na antigen (komplexem antigen-protilátka). Aktivovaný komplement způsobí destrukci v okolí antigenu.
Při KFR se napřed smísí naředěné pacientovo sérum s příslušným antigenem a se známým množstvím komplementu. Pokud je v séru přítomna hledaná protilátka, váže se na antigen a dojde k aktivaci a spotřebování přítomného komplementu. Nyní se přidají beraní erytrocyty a protilátka proti povrchu těchto erytrocytů ("amboceptor"). Byly-li v séru pacienta hledané protilátky, účinný komplement již nezbývá a erytrocyty nepoškozeny sedimentují na dně jamky. To je důkaz přítomnosti hledaných protilátek v séru pacienta. V opačném případě se komplement nespotřeboval, aktivuje se až nyní a způsobí lýzu erytrocytů. To signalizuje nepřítomnost protilátek v séru pacienta. Viz schema.
Poznámky:
Ukázka na této stránce znázorňuje stanovení titru protilátek proti Mycoplasma pneumoniae.
Příprava |
Vazba komplementu |
Průkaz volného komplementu |
Laborantka si popíše mikrotitrační destičku. |
||||||||||||||
Pipetování ředidla (pufrovaný fyziologický roztok) a komplementu. | ||||||||||||||
Dekomplementace vyšetřovaných vzorků séra ve vodní lázni při 56°C 30 minut. | ||||||||||||||
Vyšetřované sérum je přeneseno do první jamky sloupce, která obsahuje sedminásobný objem ředidla (další jamky obsahují objem ředidla shodný s přidávaným a dál přenášeným objemem). | ||||||||||||||
Postupným přenášením séra do dalších jamek s fyziologickým roztokem se sérum ředí geometrickou řadou. Zde se začíná titrem 8 - sérum předředěno 1:7 - následuje postupné ředění 1:1. Získáme řadu titrů 8-16-32-64 ..1024. | ||||||||||||||
Do všech jamek se přidá stejné množství antigenu. Inkubuje se přes noc. Dojde k reakci přítomných protilátek s antigenem, tím k aktivaci komplementu a jeho spotřebování. | ||||||||||||||
Přidají se erytrocyty s amboceptorem. Po inkubaci dojde k hemolýze, pokud v jamkách z předchozího dne zůstal nespotřebovaný komplement. | ||||||||||||||
Titr séra ukazuje poslední jamka bez známek hemolýzy se sedimentovanými erytrocyty. U pacienta č. 7 je titr 8, pacient 9 je negativní. 2 dolní vodorovné sloupce jsou kontroly erytrocytů a komplementu. | ||||||||||||||
Záběry byly pořízeny v diagnostické laboratoři Vidia Diagnostika, Praha | ||||||||||||||
Schémata KFR. Posun vpřed a vzad klikáním na ikony tlačítky myši. |
|
|||||||||||||
Sérum pacienta je negativní. Po zachyceni na erytrocytu aktivuje amboceptor svým Fc fragmentem komplement a ten lyzuje erytrocyt. | ||||||||||||||
Sérum pacienta je pozitivní. Po reakci s antigenem aktivuje ("váže") pacientova protilátka komplement. | ||||||||||||||
Jiné schema KFR. Created by Mary T. Johnson, Ph.D. ©Copyright 1997-2004, Indiana University School of Medicine. |