|
Odběr kapilární krve - pacient se posadí a horní končetinu položí na podložku - kvůli lepšímu prokrvení je prsty možno masírovat - bříško prstu otřeme desinfekčním roztokem - po zaschnutí desinfekce bodneme do prstu jehlou nebo kopíčkem - první kapku krve otřeme do suchého sterilního tamponu - další kapky krve odebíráme po jedné na podložní sklíčka - odebereme alespoň 4 vzorky |
|
|
Tlustá kapka - kapku krve na podložním skle rozetřeme krouživými pohyby rohem druhého podložního skla do kruhového nátěru tak hustě, aby bylo možné číst pod nátěrem text - je-li nátěr příliš silný, může se během následného barvení ze skla odloučit - nátěr necháme uschnout (zasíláme do laboratoře) |
|
|
Tenký nátěr - kapku krve rozetřeme do tenkého nátěru kratší hranou druhého podložního skla přiloženého v ostrém úhlu plynulým pohybem do ztracena - hranu druhého skla klademe za kapku krve a táhneme jí za sklem, nehrneme ji před ním - nátěr necháme zaschnout (zasíláme do laboratoře) |
|
|
Fixace preparátů - fixujeme pouze tenký nátěr!!!, tlustá kapka se barví bez předchozí fixace - tenký nátěr fixujeme po dobu 2 minut v methanolu - fixovaný tenký nátěr necháme uschnout |
|
|
Vlastní barvení - používáme Giemsův roztok ředěný 1:10 sterilní destilovanou vodou o pH xy - preparáty vkládáme do barvící kyvety - tlustou kapku barvíme x minut - tenký nátěr barvíme x minut |
|
|
Opláchnutí
-po nabarvení opláchneme preparáty vodovodní vodou a necháme uschnout |
|
|
Výsledek
zdařilé a méně zdařilé preparáty. |
|
|
Hodnocení preparátů - preparáty prohlížíme pod mikroskopem při zvětšení 1000x imersním objektivem - v tlusté kapce prohlédneme v jednom zorném poli větší objem krve než v tenkém nátěru - tlustá kapka slouží ke zhodnocení přítomnosti nebo nepřítomnosti parazita - tlustou kapku prohlédneme celou - tenký nátěr prohlížíme meandrovitě v místech, kde se erytrocyty nepřekrývají, hodnotíme morfologii parazitů a určujeme je - stanovujeme množství parazitů, tzv. parazitémii na 10000 erytrocytů, údaj uvádíme v procentech |
||
| Příklady mikroskopických obrazů - malarická plasmodia | ||
 
|
Plasmodium falciparum - tlustá kapka. Objektiv 100x. Trofozoiti - tzv. prstýnky, na pozadí rozpadlé erytrocyty. Při infekci Pl. falciparum nacházíme v periferní krvi pouze nejmladší vývojové formy, tzv. "prstýnky" a gametocyty. U detailnějšího obrázku jsou oblasti kolem dvou prstýnků úmyslně dodatečně silně kontrastovány. Jiné dva prstýnky (z mnoha) označeny šipkami. | |
 
|
Plasmodium falciparum - tenký nátěr. Objektiv 100x. Prstýnky v zachovaných erytrocytech.Trofotozoit má tmavé jádro a velkou vakuolu, která zatlačuje cytoplasmu ke kraji, proto "prstýnkový" vzhled (označeno šipkami). | |
 
|
Plasmodium vivax - tlustá kapka. Objektiv 100x. | |
 
|
Plasmodium vivax - tenký nátěr. Objektiv 100x. Infikované erytrocyty jsou až o polovinu zvětšeny. Při infekci Pl. vivax nacházíme v periferní krvi všechna vývojová stadia parazita. | |